Western Blot为什么做不出目的条带？

尝试以下方法：

1 抗体稀释比例依然是1：1000. 稀释液用脱脂牛奶。经验上，牛奶稀释抗体比BSA稀释抗体更能降低背景。

2 延长一抗孵育时间，比如之前如果是overnight，那么延长一倍，变成一抗孵育两天（你可以趁周末，让一抗孵育一个周末）。

3. 二抗的时间一定不能太长，尽量1个小时左右，若室温18°C时，可适当控制在90分钟以内，若室温高于20°C，尽量不要超过1个小时。

4 从一抗到二抗的洗涤时间和从二抗到曝光的洗涤时间一定不能少于30 min。如果用上述方法依然做不出来，那你的抗体一定是有问题的了。